2025-09-06 00:24:49
所用儀器為bio-rad的化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)。結(jié)果見圖1中c和d,可以看出,通過(guò)免疫印跡(westernblot)的方法證明了gm20541蛋白在小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、心臟、腎臟以及脾中均有表達(dá)。實(shí)施例2本實(shí)施例以小鼠為目標(biāo)動(dòng)物,對(duì)本發(fā)明提供的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的構(gòu)建方法進(jìn)行說(shuō)明,gm20541基因敲除的路線如圖2所示,具體操作如下:基因敲除小鼠獲取步驟:1將與小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有報(bào)告基因gfp的表達(dá)框、有neo抗性基因的表達(dá)框、兩端有同向排列l(wèi)oxp位點(diǎn)的第3外顯子和3’端臂克隆到bac載體(圖2)以用于替換欲敲除的gm20541基因第3個(gè)外顯子;2利用dna同源重組技術(shù)將gm20541基因中的第3個(gè)外顯子替換,得到gm20541基因條件性敲除的小鼠胚胎干細(xì)胞;3利用步驟2得到的胚胎干細(xì)胞制備得到含gm20541基因敲除細(xì)胞的嵌合體小鼠(圖2);4將步驟3得到的嵌合體小鼠和野生型小鼠交配繁育,在后代中篩選出gm20541基因敲除的雜合子小鼠(圖2)。鑒定:實(shí)施例2中長(zhǎng)距離pcr鑒定陽(yáng)性子一代鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,擴(kuò)增5’端長(zhǎng)臂使用引物對(duì)gm5’lrf和sa3’r,擴(kuò)增產(chǎn)物為。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’;sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。結(jié)果見圖3中a。小鼠卵巢早衰POF模型。上?;蚯贸齽?dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室
但是人為調(diào)節(jié)更能直接的根據(jù)所需模擬出實(shí)驗(yàn)環(huán)境,相對(duì)于自動(dòng)控制的環(huán)境模擬能有效減少意外情況的發(fā)生。2、本系統(tǒng)設(shè)置的多個(gè)代謝籠可以同時(shí)培養(yǎng)多種動(dòng)物,造模動(dòng)物多。3、本實(shí)用新型的系統(tǒng)能夠很好地模擬高原壓力、溫度、濕度以及低氧環(huán)境,還具有動(dòng)物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察功能,保障了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)控與實(shí)驗(yàn)結(jié)束后操作過(guò)程的溯源。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本實(shí)用新型實(shí)施例的技術(shù)方案,下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹,應(yīng)當(dāng)理解,以下附圖示出了本實(shí)用新型的某些實(shí)施例,因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定,對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講,在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下,還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。圖1為本實(shí)用新型一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)的主視圖;圖2為本實(shí)用新型一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)的立體結(jié)構(gòu)示意圖;圖3為代謝籠的立體結(jié)構(gòu)示意圖;圖中標(biāo)記:1-功能設(shè)備集成底座,2-飼養(yǎng)倉(cāng),3-代謝籠,4-觀察窗,5-操作窗,6-小物件傳遞窗,7-大物件傳遞窗,8-投料斗,9-飲水瓶,10-聚糞斗,11-尿液排出口,12-糞便排出口,13-進(jìn)風(fēng)系統(tǒng),14-排風(fēng)系統(tǒng),15-高原光照環(huán)境模擬裝置,16-高原溫度環(huán)境模擬裝置。上?;蚯贸齽?dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室小鼠腎纖維化(UUO)模型建立。
17-高原濕度環(huán)境模擬裝置,18-動(dòng)物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察單元,19-功能控制面板。具體實(shí)施方式為了使本實(shí)用新型的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白,以下結(jié)合附圖及實(shí)施例,對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解,此處所描述的具體實(shí)施例用以解釋本實(shí)用新型,并不用于限定本實(shí)用新型,即所描述的實(shí)施例是本實(shí)用新型一部分實(shí)施例,而不是全部的實(shí)施例。通常在此處附圖中描述和示出的本實(shí)用新型實(shí)施例的組件可以以各種不同的配置來(lái)布置和設(shè)計(jì)。因此,以下對(duì)在附圖中提供的本實(shí)用新型的實(shí)施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本實(shí)用新型的范圍,而是表示本實(shí)用新型的選定實(shí)施例?;诒緦?shí)用新型的實(shí)施例,本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所獲得的所有其他實(shí)施例,都屬于本實(shí)用新型保護(hù)的范圍。需要說(shuō)明的是,術(shù)語(yǔ)“”和“第二”等之類的關(guān)系術(shù)語(yǔ)用來(lái)將一個(gè)實(shí)體或者操作與另一個(gè)實(shí)體或操作區(qū)分開來(lái),而不一定要求或者暗示這些實(shí)體或操作之間存在任何這種實(shí)際的關(guān)系或者順序。而且,術(shù)語(yǔ)“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含,從而使得包括一系列要素的過(guò)程、方法、物品或者設(shè)備不包括那些要素,而且還包括沒有明確列出的其他要素。
進(jìn)而使一些生長(zhǎng)因子受體磷酸化。方法:有研究者用100μL的、、1%的DMBA的溶液涂抹于6周齡雌性C3H/Hen小鼠已剃毛的背部皮膚。在DMBA涂抹一周后,每周兩次將TPA(40nmol)施用到相同部位。模型驗(yàn)證:幾周后,小鼠背部皮膚上出現(xiàn)色素沉著斑點(diǎn)。組織學(xué)研究表明,小鼠真皮組織中色素細(xì)胞積累,某些色素細(xì)胞表現(xiàn)出嵌套的形態(tài)學(xué)模式。缺點(diǎn):化學(xué)誘導(dǎo)黑素瘤小鼠模型缺乏與人類疾病的臨床相關(guān)性。另外,此類模型可用于研究陽(yáng)光對(duì)黑色素細(xì)胞痔轉(zhuǎn)化為侵襲性的黑色素瘤的過(guò)程中起的作用。由于小鼠模型的免疫系統(tǒng)功能,因此也可以用于研究免疫策略。二、移植性模型移植模型是目前應(yīng)用多的模型。應(yīng)用:移植接種的黑色素瘤小鼠模型概括了黑色素瘤原位發(fā)展、轉(zhuǎn)移的一些特點(diǎn),多用于抗和轉(zhuǎn)移藥物評(píng)估。1同種移植模型同種移植模型是將小鼠黑素瘤細(xì)胞接種到具有相同遺傳背景的小鼠中獲得小鼠黑素瘤模型。此模型包括ICR小鼠的Harding-Passey黑色素瘤模型、DBA小鼠的S91黑色素瘤模型、C57BL/6小鼠的B16黑色素瘤模型,其中C57BL/6小鼠的B16黑色素瘤是常用模型。優(yōu)點(diǎn):同種移植模型具有免疫能力,可通過(guò)黑色素細(xì)胞與免疫細(xì)胞之間固有的相互作用來(lái)研究黑色素瘤與微環(huán)境的關(guān)系。裸鼠皮下成瘤:前肢近腋后皮下注射細(xì)胞懸液; 裸鼠原位瘤:胰腺成瘤;尾靜脈注射成瘤。
動(dòng)物疾病模型在人類重大疾病研究和新藥創(chuàng)制等方面具有不可替代的重要作用和價(jià)值。與自發(fā)性疾病動(dòng)物模型和環(huán)境誘導(dǎo)、物理因素、藥物誘導(dǎo)的疾病動(dòng)物模型相比,手術(shù)模型操作復(fù)雜、技術(shù)門檻高,因此也存在相應(yīng)的一些問(wèn)題,如缺乏標(biāo)準(zhǔn)化流程、穩(wěn)定性差、實(shí)驗(yàn)室之間數(shù)據(jù)可比性較差。即便是同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,重復(fù)性也是一個(gè)很大的挑戰(zhàn)。所以實(shí)現(xiàn)手術(shù)疾病模型的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化和重復(fù)性仍然是該領(lǐng)域長(zhǎng)期的目標(biāo)。針對(duì)這一現(xiàn)狀,賽業(yè)生物利用多年積累的的堅(jiān)實(shí)經(jīng)驗(yàn)、高效的團(tuán)隊(duì)組建及管理經(jīng)驗(yàn),歷經(jīng)兩年籌備,打造了一支技術(shù)過(guò)硬的小鼠手術(shù)模型服務(wù)團(tuán)隊(duì),熟練掌握多種模型的制備,具備建立復(fù)雜及復(fù)合手術(shù)疾病模型的能力。我們以項(xiàng)目“可重復(fù)”作為金標(biāo)準(zhǔn),對(duì)于客戶復(fù)雜的項(xiàng)目需求或文獻(xiàn)未見、少見的疾病模型,我們會(huì)與客戶緊密協(xié)作,認(rèn)真理解和把握需求,制定科學(xué)合理的手術(shù)模型造模方案。希望我們提供的專業(yè)且穩(wěn)定的手術(shù)模型服務(wù)可以節(jié)省您的時(shí)間和精力,讓您可以聚焦到科學(xué)創(chuàng)新性的工作上來(lái)。服務(wù)優(yōu)勢(shì)1.以實(shí)驗(yàn)“可重復(fù)”作為服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)我們以實(shí)驗(yàn)“可重復(fù)”作為金標(biāo)準(zhǔn),對(duì)技術(shù)團(tuán)隊(duì)進(jìn)行大量的手術(shù)模型操作訓(xùn)練,確保疾病模型多個(gè)批次之間數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性。2.一站式服務(wù)。慢性阻塞性肺疾病是一種具有氣流阻塞特征的慢性和(或)肺氣腫。上?;蚯贸齽?dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室
建立SD大鼠頸動(dòng)脈損傷(結(jié)扎套管)模型。上?;蚯贸齽?dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室
準(zhǔn)備碎冰和。把膜置于甲醇溶液中活化1分鐘,然后轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)膜液中平衡3分鐘后備用。2、轉(zhuǎn)膜組裝轉(zhuǎn)膜三明治夾,這一步很關(guān)鍵,重要的是膠和膜之間不能有氣泡且膜與膠要保證貼合緊密(否則會(huì)翻車),可以加多點(diǎn)轉(zhuǎn)膜液泡著。組裝好后加滿轉(zhuǎn)膜液,設(shè)置電源參數(shù),我習(xí)慣恒流轉(zhuǎn)膜,200-280毫安,1-2小時(shí),根據(jù)分子量定,如50KD的分子用60分鐘就夠了。如果一個(gè)電源帶兩個(gè)轉(zhuǎn)膜大槽即四塊膠,我就會(huì)用恒壓70-110V。這個(gè)過(guò)程重要的是做好降溫。這里簡(jiǎn)單說(shuō)一下蛋白分子量與玻璃板厚度,分離膠的濃度,轉(zhuǎn)膜電源參數(shù)的選擇問(wèn)題。如果是能用1毫米的玻璃板就不用,因?yàn)檗D(zhuǎn)膜是在電場(chǎng)的作用下蛋白分子從膠上遷移到膜上,1毫米膠的蛋白遷移距離要比。選擇更薄的膠蛋白轉(zhuǎn)膜時(shí)間可以減少,從而減少發(fā)熱,以免膠變形,條帶也會(huì)更好看。然后是分離膠的濃度,如果是150—200KD的分子選10%以下的的分離膠,200—300KD的選8%的,300KD以上的選6%的,小于30KD的200mA30分鐘,30-100KD的按分子量的數(shù)值算,如70KD,250mA70分鐘;100-150KD的250mA100分鐘;150—300KD的分子轉(zhuǎn)膜條件用280毫安(以上均是對(duì)于,),120分鐘足矣,前提是膠的濃度相適應(yīng)。五、封閉孵一抗1、封閉轉(zhuǎn)膜結(jié)束后。上?;蚯贸齽?dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室